在做檢測(cè)時(shí),有不少關(guān)于“TTC法如何測(cè)最低抑菌濃度”的問(wèn)題,這里百檢網(wǎng)給大家簡(jiǎn)單解答一下這個(gè)問(wèn)題。

TTC法測(cè)定最低抑菌濃度（ MIC）的步驟：藥液配制及除菌、96孔板準(zhǔn)備、抗菌藥物二倍稀釋、加入菌液、設(shè)立對(duì)照、培養(yǎng)與觀(guān)察、MIC值判定。

一、TTC法測(cè)定最低抑菌濃度（ MIC）的步驟

1、藥液配制及除菌

首先，根據(jù)藥物的效價(jià)或含量及所需體積，準(zhǔn)確稱(chēng)取抗菌藥物，并使用適宜的溶劑（如PBS緩沖液，根據(jù)藥物種類(lèi)選擇不同pH值）稀釋至所需濃度。抗菌素藥物通常通過(guò)過(guò)濾除菌，而化學(xué)合成類(lèi)藥物則可能需結(jié)合過(guò)濾和高壓滅菌處理。

2、96孔板準(zhǔn)備

在96孔板的每個(gè)孔中加入含TTC的空白肉湯100μl，作為培養(yǎng)基。此步驟確保每個(gè)孔中均有相同的起始條件。

3、抗菌藥物二倍稀釋

在A/B/C三排的第一孔分別加入濃度為512IU/ml或μg/ml的藥液100μl，隨后進(jìn)行二倍稀釋。即第一孔加藥后充分混勻，吸取100μl加入第二孔，再混勻后吸取100μl加入第三孔，以此類(lèi)推，直至最后一孔。此時(shí)，每孔藥物濃度從左到右依次為：256, 128, 64, 32, 16, 8, 4, 2, 1, 0.5, 0.25, 0.125 IU/ml或μg/ml。

4、加入菌液

在每個(gè)孔中加入稀釋好的菌液100μl，形成測(cè)定一個(gè)藥物MIC值的三次重復(fù)（A/B/C三排樣品）。每孔的最終藥物濃度從左到右依次減半。

5、設(shè)立對(duì)照

在同一塊板的G排設(shè)立陰性對(duì)照（僅加空白肉湯不加菌液），H排設(shè)立陽(yáng)性對(duì)照（加菌液不加藥液），以驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)條件的有效性。

6、培養(yǎng)與觀(guān)察

將96孔板放入37度恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)16～20小時(shí)后觀(guān)察結(jié)果。若某孔TTC顯示紅色，表示有細(xì)菌生長(zhǎng)；若不變色，則表示細(xì)菌被抑制。

7、MIC值判定

橫排中未變紅色的最后一孔所對(duì)應(yīng)的濃度即為該藥物的MIC值。

二、TTC法測(cè)量最低抑菌濃度（ MIC）的優(yōu)勢(shì)

TTC法利用TTC的氧化還原性質(zhì)，通過(guò)其顏色變化來(lái)指示細(xì)菌的生長(zhǎng)狀態(tài)。TTC的氧化態(tài)是無(wú)色的，當(dāng)細(xì)菌存在且生長(zhǎng)活躍時(shí)，其內(nèi)部的脫氫酶能將TTC還原為不溶性的紅色三苯甲月替（TTF），從而顯現(xiàn)出紅色。若細(xì)菌被藥物抑制而無(wú)法生長(zhǎng)，則TTC保持無(wú)色，據(jù)此可判斷藥物的抑菌效果。

1、直觀(guān)性：通過(guò)顏色變化直接判斷細(xì)菌生長(zhǎng)情況，結(jié)果易于觀(guān)察。

2、準(zhǔn)確性：采用微量二倍稀釋法，能夠精確測(cè)定MIC值。

3、高效性：可在同一塊板上進(jìn)行多種藥物的MIC測(cè)定，提高實(shí)驗(yàn)效率。

三、TTC法測(cè)MIC的實(shí)驗(yàn)材料與設(shè)備

1、微生物菌株：選擇待測(cè)的微生物菌株。

2、抗菌物質(zhì)：需要測(cè)定其MIC的抗菌物質(zhì)。

3、TTC試劑：2,3,5-三苯基氯化四氮唑。

4、培養(yǎng)基：適合微生物生長(zhǎng)的培養(yǎng)基。

5、微量移液器：用于精確取液。

6、培養(yǎng)箱：用于微生物培養(yǎng)。

四、TTC法測(cè)MIC的注意事項(xiàng)

1、精確稀釋?zhuān)捍_保抗菌物質(zhì)的稀釋過(guò)程精確無(wú)誤，避免因操作誤差影響MIC的測(cè)定結(jié)果。

2、均勻混合：在將微生物懸液與抗菌物質(zhì)混合時(shí)，要確保混合均勻，避免局部濃度過(guò)高或過(guò)低。

3、適宜培養(yǎng)條件：根據(jù)微生物的生長(zhǎng)特性選擇合適的培養(yǎng)條件，如溫度、pH值等。

4、觀(guān)察時(shí)間：TTC的添加時(shí)間和觀(guān)察時(shí)間需要根據(jù)實(shí)驗(yàn)?zāi)康暮臀⑸锷L(zhǎng)速度來(lái)確定，以確保結(jié)果的準(zhǔn)確性。